尤克里里的定音从四弦到一弦分别是：GCEA，也就是C调的5136，通常尤克里里按照这个定音调音，有特殊需要可以调成别的。
琴弦越紧音调越高，通常是从松到紧开始调音。
为了追求效率，可以使用上弦器加快上弦速度，但要注意旋转弦钮不要太急，速度太快琴弦容易断。上弦时时刻注意音高变化，别不小心超过了标准音高还继续拧紧，搞不好会断弦。
调音要有定音的辅助工具。
最便利的工具是电子调音器。一般靠纽扣电池供电，夹在琴头上，边旋转琴钮边拨响正在调解的那根琴弦，屏幕上会即时显示当前琴弦发出的声音接近哪个音以及准不准。比如如果琴弦的声音接近G，显示器上会显示G这个字母，并且会显示这个音是低于G还是高于G，当这个音刚好等于G的时候，就说明这根弦目前的音是G。有些调音器只会告诉你这个音是G，不管这个G是在哪个八度上的，而有些调音器会做区分。这个只要注意一下就可以了。用调音器的时候要时刻注意显示器的变化，不要超过了标准音还继续拧，已经拧得很紧了调音器还没显示正确的音，不小心弦就断了。
手机也可以当做调音器用，下载调音软件，通过手机上的拾音器拾取琴弦的声音，使用方式跟电子调音器类似，不过一般这些软件是可以指定某跟琴弦的。
没有调音器也没有调音软件怎么调音？假如身边有别的乐器，或者已经调好音的尤克里里，可以听着别的乐器发出的GCEA来对着自己的琴调音。这有点考验耳朵的功力。假如没有其他乐器做参考，只有一把没调音的尤克里里，却还想用它弹奏音乐。那只好估一个音高了。可以先把一根弦调成某个音高当做标准音，再按照以下关系把剩余的三根线的音高按照标准音调好即可，只要各个琴弦的音高关系没错，这把琴就能演奏音乐，即使它不是按照尤克里里的标准音高定弦的。
尤克里里的四弦二品的音高等于一弦空弦音，二弦五品的音高等于一弦空弦音，三弦四品的音高等于二弦空弦音。
琴弦从上码到下码之间的距离叫做有效弦长，把琴弦按下后，实际上琴弦的整体长度是变长的，而且有效琴弦越短变化越明显。这就导致有效琴弦越短的琴音准越难做好。像尤克里里这种小乐器，音准不好一直是被人诟病的一个毛病。在网上见过品丝是弯曲形状的吉他，据说是为了保证音准而特殊设计的，但是我们一般人肯定是享受不了这种待遇的，而且这种设计不知道换套材质不同的琴弦会不会还有偏差。
音准好不好是衡量一把琴好不好最基本的因素。有些音准做得不好的琴，空弦音都按照标准调好了，按到高八位的时候音准就偏差很远，甚至连耳朵都能明显听得出音不准，用这种琴练习，就很难培养出好耳朵甚至是一种折磨。
测试尤克里里音准，一般会先把空弦音调好，再按住12品，测试12品的音，12品的位置正好是琴弦有效弦长的中心位置，这个位置的音刚好是空弦音的高八度音，因此12品的音从四弦到一弦仍然是GCEA，只是比空弦高了一个八度，而一般电子调音器是能够识别出高八度的GCEA的，只要12品的音是准的，那么大概可以判断这把琴的音准做的还可以。这是一个比较粗略的方法，之所以说粗略，是因为12品的音准并不代表其他的品都是准的。但是这个方法很简便，很多尤克里里电子调音器很多不能识别GCEA之外的音，没有更好的测量设备也只能默认为12品准的话其他的音也差不了太多。
